胶体金
来源:   日期:2018-04-17

         金标记免疫反应是一种将胶体金颗粒的肉眼呈色与抗原抗体的特异性反应结合在一起形成的免疫检测技术。这种免疫金反应呈现出多种多样的应用方式,其中有一种重要应用更是结合了层析原理,称为金标记免疫层析。

  

  在过去的十年里,基于膜上的金标记免疫层析的快速诊断技术的发展,创造了巨大的市场,应用领域包括敏感标志物、传染病、环境污染物、毒品、早孕以及兽医等领域。

      本文系统先容了金标记免疫层析的基础原理、技术要点及反应模式。

  金标记免疫层析试纸的原理及基本结构

  金标记免疫层析的原理包括胶体金的显色技术、层析分离结合抗原抗体以及抗原抗体的特异性免疫反应三方面的技术。

  

  以双抗体夹心法检测人绒毛膜促性腺激素(HCG)为例。硝酸膜预包被一株单克隆抗体,胶体金标记另一株单克隆抗体。在硝酸膜上加入样本与胶体金标记的单克隆抗体,如果样本中含在HCG,则在硝酸膜上形成了固相单抗-HCG-金标单抗的三明治复合物。未结合的抗原及金标记抗体均层析的方式自动去除。最后膜上只有三明治复合物存在。因为固相单抗是接线条式包被的,因此最后的三明治复合物呈现为一条红色的线条(胶体金的颜色)。

  

  如果样本中没有HCG存在,则不能形成三明治复合物,金标抗体会通过层析效应离开硝酸膜,最后则不能出现线色的线条。

  

  

  图1:金标条的正视图与三维图

  上图是人绒毛膜促性腺激素(HCG)金标记免疫层析试纸的原理图。硝酸膜(NC膜,Membrane)上亦预先包被有捕获试剂(Capture reagents,第一条是检测线(抗-HCG),第二条是质控线(羊抗鼠IgG)。金标记单抗(Canjugate)则在结合垫上,并粘贴在NC膜的下端,上面再覆一层样品垫(Sample Pad)。在NC膜的另一端粘上吸水垫(Absorbent pad)。这样试纸条就组装完成了。

  

  在实验时,样品首先加在样品垫上,样品中的HCG与结合在胶体金表面上的金标抗体结合(金标抗体-HCG)并一起向上层析,在流经NC膜的时,检测线上的抗-HCG与结合有胶体金颗粒的HCG反应形成三明治复合物,并停留在检测线的位置,未结合的金标抗体继续向前流动,流至质控线位置时被羊抗鼠IgG捕获(固相二抗-金标抗体),停留在质控线的位置。剩余的样品与金标记物都会继续流向吸水纸。

  检测线或质控线捕获到金标抗体后,会呈现出红色的线条。如果是阴性标本,则只有质控线显色,如果是阳性标本,则检测线与质控线同时显色。

  

  

  

  2:层析卡的结构剖面图

  

  有时候,金标记免疫层析试纸会装在一个塑料卡内,制成层析卡。如图2所示。

  1) 塑料外壳,或称为卡座,提供结构上的压紧。

  2) 背衬板,一般预刷有粘胶,以方便将其它材料粘接在一起。

  3) 样本垫及加样口,样品加入的位置。

  4) (金标)结合垫:预置胶体金标记的抗原或抗体。

  5) 硝酸纤维素膜(NC膜):预置蛋白包被形成的检测线与质控线。

  6) 吸取垫:放在硝酸膜上端,以帮助层析。

  以上均以双抗体夹心法例。如果改变实验设计,可以实现双抗原夹心法,竞争法,间接法与捕获法等反应模式。 

丙型肝炎系列
肿瘤系列